一、前言
在分子基因選殖中常做的實驗之一就是細菌細胞的轉型作用。本次實驗要將pGEX-1、Tal238-331/pGEX1 質體轉型入所製備的勝任細胞(Competent cells)內，質體可藉由細菌DNA 複製機制而達到質體DNA 大量複製的目的。本實驗中將不含任何質體的宿主細菌(大腸桿菌菌株 BL21)製備成勝任細胞，然後把重組質體DNA 及原始質體DNA(為不含有外源DNA 之載體質體DNA)分別轉型進入勝任細胞中，此稱為細菌細胞轉型作用(Transformation)，因載體DNA 上帶有青黴素(Ampicillin, Amp)抗生素抗藥性基因β-lactamase，可以利用ampicillin 抗生素進行篩選轉型成功之菌落，菌落經隔夜培養後可用以萃取質體DNA，再利用基因特異性引子進行聚合酶鏈鎖反應(Polymerase chain reaction, PCR)，或以限制酵素(Restriction enzyme)切割質體DNA 鑑定並確認重組質體。
二、材料與方法
（一）材料
質體pGEX-1、∆Tal 238-331/pGEX-1、大腸桿菌菌株 BL21、LB 培養液、LB agar/Amp (Ampicillin 200μg/ml)固體培養基、0.1 M CaCl2
（二）勝任細胞之製備
將1.5 ml 菌液置於1.5 ml 微量離心管中。將離心管以平衡方式置於離心機中，以3,000 rpm 離心1 分鐘後，將上清液倒掉後，以短暫離心方式將剩餘液體離心下來後，將上清液以微量滴管小心吸除乾淨。加入500μl 冰冷 0.1 M CaCl2，將蓋子蓋上後，稍微震盪或以手指輕彈管尖使菌液混和均勻，靜置冰浴作用10 分鐘。重複上述第4 步驟。最後，將細菌離心沉澱去除上清液後，加入200μl 0.1 M CaCl2，以手指輕彈管尖使菌液混和均勻，分裝於3 支1.5 ml 微量離心管中(每管50μl)，置於冰上備用。
（二）轉型作用
將重組質體Tal238-331/pGEX1 及原載體pGEX1 之質體DNA (1μl)分別加入置於冰上的含勝任細胞微量離心管內，另一管則不加重組質體，作為陰性對照組。輕輕拍打微量離心管混勻後，置冰浴20 分鐘。將3 支離心管置換於42℃水浴heat shock 90 秒(時間與溫度皆須準確)。水浴後，即刻置於冰上5 分鐘。加450μl LB medium 於每一微量離心管混勻後，於37℃震盪培養40 分鐘。各取50μl 分別均勻塗於LB/Amp 固體培養基(plate)上。待塗盤的菌液完全被培養基吸收後，將培養皿倒置並於 37℃培養16~20小時。次日由助教將plate 置於4℃冰箱。
三、結果
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| （圖一） |
第三組實驗結果呈現，a組完全沒有菌落，b組與c組都有點狀菌落，但b組菌落數大於c組。第六組（本組）實驗結果呈現，a組一樣完全沒有菌落，b組有點狀菌落，c組有片狀菌落。（圖一）
五、結論
b組與c組都有細菌的產生，因此都有轉植成功。但本組的c組因塗盤沒有塗乾就拿去培養，導致細菌無一開始無法附著於培養基上，而均勻懸浮於培養基上。b組與c組的菌落數不一，最主要是因為重組DNA的濃度不一樣。
六、引用文獻
1. 陳錦翠。2017。生技實驗。國立中山大學生物科學系。1-2頁
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