一、摘要
實驗目的為鑑定血型、觀察血球細胞與白血球內醣類分布情形。使用抗A/B血清、賴德氏與傑姆沙氏染色法(Wright–Giemsa stain, W-G stain)與過碘酸/希佛染色法(Periodic acid-Schiff stain, PAS stain)去鑑定與觀察。結果，我的血液不能與抗A/B血清發生凝集反應，血球細胞內部部分會與W-G stain和PAS發生反應並有不同程度地上色。因此，不能與抗A/B血清發生凝集反應的血型為O型，且血球細胞上色情形各有不同，可以拿來鑑定各種血球細胞和判斷白血球內醣類分布情形。
二、前言
檢測血型有兩種方法：血凝檢查法與凝膠微柱法(gel microcolumn assay, GMA)(Novaretti, et al,2003)，其原理皆為帶有A/B抗原之血液分別會與抗A/ B血清發生凝集反應，而本實驗選擇前者的方法，因前者操作簡單方便。
鑑定血球的方法有數種，其中常見者為Romanowsky Stain、賴德氏染色法(Wright's stain)、傑姆沙氏染色法(Giemsa stain)、賴德氏與傑姆沙氏染色法(W-G stain)、劉氏染色法（Liu's stain），其中後四者為前者的改良。W-G stain主成分為甲基藍(methylene blue)、甲基天藍(methylene azure)和其兩者的伊紅化合物(eosinates)。染色機制為甲基天藍為鹼性，可將細胞內嗜鹼性的部分染成藍色；伊紅化合物為酸性，可將細胞內嗜酸性的部分染成紅色。本實驗所用的方法為賴德氏與傑姆沙氏染色法，因為此方法所染出的血球細胞比其餘方法較清晰可見。(陳，2016)
醣類定位最常見的染劑就是PAS stain，可以使不溶性的多醣類染色其原理為細胞內多醣類物質中的1,2-甘醇會被過碘酸氧化成雙醛類；Schiff試劑會與醛類作用，形成紫紅色染料而沉積於細胞內多醣所在處，該反應稱為PAS陽性反應，以前也稱為糖原染色。最後加入蘇木素溶液做對比染色的處理，會使細胞核染呈深藍色。預計會在第1區（H）看到細胞質呈紫紅色，細胞核呈暗藍色；第2區（D+H）看到細胞核呈暗藍色；第3區（D）無上色；第4區（ ）：看到細胞質呈紫紅色。（圖一）(陳，2016)
三、材料與方法
採血針 一枝 血液 少量
複式顯微鏡 一台 賴德氏與傑姆沙染色試劑 一罐
蒸餾水 一罐 絕對酒精與福馬林溶液 一缸
澱粉酵素(1％) 半缸 1％過碘酸溶液 一缸
鋁箔紙 一捲 亞硫酸鹽漂白溶液 一缸
鑷子 一枝 蘇木素溶液 半缸
清潔劑 一瓶 酒精棉片 三片
Schiff劑 一缸 70％酒精 一瓶
（一）檢測血型：一開始，拿抗A/B血清各滴在載玻片上，先用酒精消毒指頭再用採血針刺進指腹，並擠出血液滴在血清上，攪拌均勻。
（二）W-G stain：先製作出一片血液抹片，血液風乾後，先滴入1ml W-G stain，等2分鐘後；在滴入2 ml蒸餾水，再等4分鐘後，用清水沖洗背面，直到抹片成粉紅色為止。
（三）PAS 反應：再製作出一片血液抹片，自然風乾後，泡入固定液（絕對酒精：福馬林＝9：1）10分鐘，用自來水清洗2分鐘，再用蒸餾水浸潤風乾。將一半玻片浸泡在澱粉酵素溶夜中30分鐘，用自來水清洗2分鐘，再用蒸餾水浸潤。玻片浸泡在過碘酸溶夜中10分鐘，用自來水清洗1分鐘，再用蒸餾水浸潤。將玻片浸泡在Schiff溶夜中10分鐘，最後再浸泡在亞硫酸鹽漂白溶液中3分鐘後風乾。再將另一半玻片浸泡在蘇木素溶液對比染色2分鐘。（圖一）
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| （圖一） |
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| （圖二）血型鍵定 |
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| （圖三）紅血球 |
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| （圖五）帶狀中性球 |
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| （圖四）節狀中性球 |
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| （圖六）淋巴球 |
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| （圖七）血小板 |
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| （圖八）PAS反應，上色情形不是很理想 |
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| （圖九）異常血球細胞 |
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| （圖十）鹼性球 來源：Gladden Willis |
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| （圖十一）酸性球 來源：林棨堂、林祐安 |
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| （圖十二）單核球 來源：林棨堂、林祐安 |
四、結果
（一）檢測血型：我的血液不會與抗A/B血清發生凝集反應；我組員的血液會與抗B血清發生凝集反應。（圖二）
（二）W-G Stain：血球細胞內部部分會與W-G stain發生反應並有不同程度地上色。
1.紅血球：最多的血球細胞，無核，會被W-G stain染成粉紅色，中間凹陷，故顏色較淡。（圖三）
2.中性球：白血球中數目第一多，細胞核3-5葉、深紫色。年輕的細胞核不分葉，故稱帶狀中性球；成熟的細胞核有分葉，故稱節狀中性球（圖四、圖五）。
3.淋巴球：白血球中數目第二多，細胞核比例較大且呈圓形、深紫色，細胞質比例較小、藍色。（圖六）
4.血小板：不規則狀的細胞碎片，功能為凝結血液，呈藍色或紫色。（圖七）
（三）PAS 反應：血球細胞內部部分會與PAS stain和蘇木素發生反應並有不同程度地上色。（圖八）
五、討論
基於帶有A/B抗原之血液分別會與抗A/ B血清發生凝集反應，因此從結果中可以推測會發生B凝之血液為B型、不會發生凝集之血液為O型。
W-G stain使不同血球細胞有不同上色情行，所以可以拿來鑑定各種血球細胞。其中本實驗中發現有血球細胞上色情形不同於正常血球細胞（圖九），其形狀為圓形、周圍為粉紅色、中心為紫色圓形、數量很多、上色比例平均，像似紅血球染色的特徵，並且依照突出部位會較深色、凹陷部位會較淺色的原理，故猜測此立體形狀類似凸盤，而且染色過程中有添加低張溶液進去，可能為膨脹的紅血球細胞。本實驗結果並無發現鹼性球、酸性球與單核球，可見這幾些白血球在血液所佔的比例不高，因此不易找到。尤其鹼性球更為少見，比較過其他兩組的實驗結果，發現並無一組找到鹼性球。
PAS反應中，只有找到一張上色比較成功的圖，圖中可見到沒有很密集的淡紫色圓圈，周圍帶有淡粉紅色背景。不密集圓圈應為白血球的細胞核，可以證實紅血球無細胞核，因為沒有很密集，而淡粉紅色背景有三種可能，第一種可能為紅血球被染色所致，但因紅血球多醣類所佔的比例很低，又導致顏色很淡；第二種可能為染劑殘留在載玻片上；第三種可能為染色過程失敗，導致顏色上不去。
六、引用文獻
1.陳韻安。2016。生物科學系普通生物學實驗。國立中山大學。第2-8頁
2. Gladden Willis. Human Monocyte White Blood Cell, LM. AllPosters
3. Novaretti M.C.Z., Jens E.,
Pagliarini T., Bonifacio S.L., Dorlhiac-llaoer P.E., Chamone D.A.F. Comparison
of conventional tube test with DiaMed gel microcolumn assay for anti-D
titration. Clin Lab Haematol. 2003;25:311–315.
補充
鹼性球：因與鹼性染劑之間具有高親和力而得名，細胞核呈紫色，凹入圓形，細胞質內有深紫色的嗜鹼性小體。（圖十）
酸性球：因與酸性染劑之間具有高親和力而得名，細胞核通常為2葉、深紫色，細胞質內有橘紅色的嗜鹼性小體。（圖十一）
單核球：有時有偽足，圓形至卵形，細胞核為圓形或腎臟形、深紫色，細胞質成灰藍色，含少數的紫色小粒。（圖十二）
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