[實驗] Coomassie Blue staining

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一、實驗原理

Coomassie Blue staining使用的染劑是Coomassie Brilliant Blue R-250(CBR)，因其顏色帶點微紅，故用R命名。染色原理為CBR上的芳香基團與蛋白質的非極性區結合，以及CBR上的正電基團與所帶負電的蛋白質結合，形成藍色的蛋白質-染劑複合物。

二、實驗步驟

將跑膠完成的膠體從固定夾中取出並拆開玻璃片，將膠體置於盒子中。加入Coomassie Blue solution 蓋過膠體，搖晃5分鐘後，並移除溶液。再倒入退染液並將擦手紙置於容液面上，放置振動器上。待膠體顏色與溶液顏色相仿時，即可換新的退染液並重複此動作，直到膠體邊緣呈透明。即可將之移入清水中一夜，隔日取之照相。

三、實驗結果

M:marker, #1: 2μL pGEX-1, #2: 5μL pGEX-1, #3: 10μL pGEX-1, #4: 2μL ∆tal, #5: 5μL ∆tal, #6: 10μL ∆tal
pGEX-1組在約25kDa處有一條明顯的條帶；∆tal組在約33kDa處有一條明顯的條帶。而這兩條與我們所植入的質體基因所轉譯出的蛋白質大小一樣，因此上次實驗有轉植成功。而其餘條帶為細菌染色體所轉譯出的蛋白質。

四、實驗心得

此次實驗到了快晚上七點才開始做染色與退染的步驟，染劑的味道不慎好聞但顏色倒是挺美的，藍中帶紅。起初在染色的時間拿捏必須精準，過快或過慢都會使結果失敗，而退染的過程中只需間隔幾分鐘顧一下退染的情形並依情況換新染劑。直到膠體邊緣呈透明後，即可浸泡於水中至隔夜。

五、問題

1. Coomassie Blue stainig的染劑與Bradford試劑都是與蛋白質作用產生藍色複合物，請問兩者差異在哪？
Coomassie Blue stainig 與 Bradford試劑比較
CBR: Coomassie Brilliant Blue R-250, CBG: Coomassie Brilliant Blue G-250

2. 蛋白質體染色法除了Coomassie Blue stainig以外，常用的還有Silver staining，請說明Silver staining的原理。同時列舉出另一種染色法，說明其原理並比較這三種染色法的差異性（至少五項），請用表格呈現。

  • Silver staining原理：以銀氨錯離子形式與蛋白質結合，銀離子再還原成金屬銀的深褐色。
  • Carbohydrate staining原理：醣蛋白上相鄰的醇基可用過碘酸氧化成醛基後，再以Periodic acid-Schiff's試劑染成紅色。

三種蛋白質染色的比較
CBR: Coomassie Brilliant Blue R-250, PAS stain: Period acid-Schiff's stain

六、參考文獻


  1. 莊輝榮。2008。電泳檢定法。國立台灣大學農業化學系 [2017.05.31]
  2. WikiPedia. 2017. Tollens' reagent [2017.05.31]
  3. WikiPedia. 2017. Coomassie Brilliant Blue [2017.05.31]
  4. WikiPedia. 2017. Periodic acid–Schiff stain [2017.05.31]

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